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技术文章|细胞污染及防治措施
692 人阅读发布时间：2023-04-18 11:50
在细胞培养实验中，流传着一个词语，叫做“谈污色变”，污染对于每一位细胞培养者来说，都是灾难，它让我们的努力都付诸东流，所以，要想细胞正常生长，实验圆满完成，我们要先了解常见的细胞污染有哪些，并且针对这些污染要做出有效的防治措施。
二、真菌污染
污染细胞的真菌多为烟曲霉、黑曲霉、孢子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌，培养液不会出现颜色变化，但时间长了以后会有菌丝或者菌团漂浮。显微镜下呈现树枝状或者串珠状。细胞真菌污染后，较难根除，建议消杀后丢弃。
三、支原体污染
细胞被支原体污染后，细胞形态不会发生明显变化，培养基也不会变浑浊，支原体可以和细胞共同生存，细胞不会死亡，但支原体会抑制细胞生长，影响细胞正常的代谢功能。需要特殊的检测方法来判断细胞是否被支原体污染，常用的方法有：DNA荧光染色法、支原体培养法、PCR法等。
四、黑胶虫污染
黑胶虫污染是近些年发现的一种细胞污染物，污染后在高倍镜下可观察到有“小黑点”在做布朗运动。对于它的分类，至今没有明确的说法与证明。它与细胞存在竞争关系，细胞生长状态好，数量多，黑胶虫生长就会较少，但当黑胶虫数量逐渐增多后，就会对细胞生长产生较大影响，甚至会引起细胞死亡。
五、防治措施
1、实验环境
洁净区在设计时，应将无菌工作区置于实验室中相对僻静的地方，应没有过道，没有产生灰尘、气流等因素的干扰。
层流柜或生物安全柜洁净级别应为A级，洁净区应为B级，需定期进行沉降菌检测及风速风量的检测。
每周对实验环境进行打扫及消毒：84消毒液和新洁尔灭交替使用清洁地面；紫外灯照射及臭氧熏蒸对洁净区环境进行整体消毒。
2、无菌操作
操作者应具备较强的无菌意识，进入洁净区前，清洗双手，更换无菌服，戴好口罩及手套，头发、手腕等要避免裸露在外，减少走动次数，操作时尽量避免互相交流。
实验前，紫外灯照射洁净区30min以上，实验结束后，紫外灯照射洁净区30min以上，保持实验环境清洁。
操作时，若有溢出物，应及时用75%酒精擦拭，所有进入操作台的物品，均应用75%酒精擦拭表面，进行消毒，避免物品携带污染物，造成培养物的污染。
3、仪器设备
每周或每月定期用75%酒精，对实验室内仪器设备进行清洁消毒，特别是培养箱的储水盘，可每周更换一次水，并且在水中添加抑菌剂。
4、试剂
未灭菌的试剂，均需高压灭菌或过滤除菌后才能使用。
为了能够安全的、正常的进行细胞培养，如果遇到培养物被污染的问题，建议丢弃被污染的培养物，除非该细胞非常重要，可以尝试去消除污染。
一、细菌污染
细胞被细菌污染后，通常情况下，细胞培养液会变黄，变浑浊，镜下观察可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮。常见的污染细菌为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，这两种细菌对青霉素和链霉素较为敏感，所以细胞轻度污染时，建议用双抗（青链霉素）清洗处理，一般情况下，一周左右细胞可恢复正常；重度污染时，建议消杀后丢弃。
二、真菌污染
三、支原体污染
四、黑胶虫污染
五、防治措施
1、实验环境
层流柜或生物安全柜洁净级别应为A级，洁净区应为B级，需定期进行沉降菌检测及风速风量的检测。
每周对实验环境进行打扫及消毒：84消毒液和新洁尔灭交替使用清洁地面；紫外灯照射及臭氧熏蒸对洁净区环境进行整体消毒。
2、无菌操作
实验前，紫外灯照射洁净区30min以上，实验结束后，紫外灯照射洁净区30min以上，保持实验环境清洁。
操作时，若有溢出物，应及时用75%酒精擦拭，所有进入操作台的物品，均应用75%酒精擦拭表面，进行消毒，避免物品携带污染物，造成培养物的污染。
3、仪器设备
4、试剂
为了能够安全的、正常的进行细胞培养，如果遇到培养物被污染的问题，建议丢弃被污染的培养物，除非该细胞非常重要，可以尝试去消除污染。