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公司新闻/正文
细胞干货 |HT22细胞培养研究——一份详实的操作指南
298 人阅读发布时间：2025-12-03 16:14
HT22细胞系是一种永生化的小鼠海马神经元细胞系，源自于HT-4细胞系中分离出的亚克隆细胞系。其亲本细胞系HT-4来自于具有温度敏感的SV40 T抗原的小鼠神经元组织的永生化。HT22对谷氨酸高度敏感，常被用作研究谷氨酸对神经细胞毒性的模型系统。
一、细胞介绍
1.1.细胞参数
【细胞名称】HT22（小鼠海马神经元细胞）
【细胞来源】HT-4细胞系的亚克隆，源自具有温度敏感的SV40 T抗原的小鼠神经元组织的永生化
【别称】Hepatoma-22; Hepatoma 22
【年龄（性别）】不详
【组织来源】海马
【细胞类型】转化细胞系
【种属】小鼠
【生长特性】贴壁生长
【细胞形态】神经细胞样
【冻存条件】冻存液：55% 基础培养基+40% FBS+5% DMSO；温度：液氮
【培养基】RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S
【培养条件】 气相：空气95%；CO2，5%，温度：37℃
【 推荐传代比例】1:4-1:6
【推荐换液频率】2-3次/周
【推荐传代周期】24-36小时
【 注意事项】
-
HT22细胞系是小鼠海马神经元细胞，在体外培养中，推荐传代4-5代左右，细胞活力逐渐下降，状态变差。
-
通过腹水培养可恢复细胞活力。
-
HT22细胞贴壁生长，对谷氨酸高度敏感。
【支原体检测】阴性
【运输方式】常温运输（T25方瓶）或干冰运输（冻存管）
【用途】研究谷氨酸诱导的神经元细胞毒性，神经科学研究
【生物安全等级】BSL-1
【保藏机构】
-
CLS; 305158
-
Millipore; SCC129
-
Ubigene; YC-A004
【倍增时间】17h
所用产品：
1.2.质控信息
【无菌检测】阴性
【支原体检测】阴性
【物种/STR鉴定】正确
二、培养操作
/ 金源康生物 /
2.1、复苏培养操作
（1）恒温水浴锅预热至37℃备用，或者细胞复苏仪开机预热准备；
（2）准备15ml离心管，并向其中加入8ml完全培养基（JYK-CN-0003M）待用；
（3）将细胞冻存管从-80℃冰箱或液氮中取出，放入PE手套中，迅速投入恒温水浴锅中或者直接置于细胞复苏仪中；
（4）在恒温水浴锅中，用力摇晃冻存管，使其在1分钟内融化；在细胞复苏仪中，按照程序操作即可；
（5）用纸巾或无尘布擦拭水渍，75%酒精消毒后转移至生物安全柜或者超净工作台。用移液枪吸取细胞悬液，缓慢滴加到步骤2中准备好的离心管；
（6）1000rpm离心5min；
（7）弃上清，用新鲜完全培养基（JYK-CN-0003M）重悬细胞，取样计数后，根据实验需要接种至新的无菌培养器皿中；
（8）镜检细胞状态，拍摄100x、200x照片各3张；
（9）置于37℃，5%CO2培养箱中进行培养，24h后镜检观察细胞复苏情况（贴壁情况或者激活情况）。
所用产品：
2.2、传代培养操作
（1）取培养中的细胞，镜下观察细胞汇合和生长状态，若细胞汇合长至90%以上，即可传代，拍摄100x、200x照片各3张；
（2）去除培养上清，加入PBS（JYK-SH-001）清洗细胞（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）；
（3）加入0.25%胰酶（JYK-SX-002）（T25瓶，加入2ml；T75瓶，加入4ml），放入培养箱中或者室温下消化解离3min左右，可用显微镜观察状态，若观察到细胞离散成单个圆形、细胞间出现间隙、呈沙状移动，并悬浮在培养液中即可；
（4）加入完全培养基（JYK-CN-0003M）（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）终止消化，反复吹打瓶底和细胞，使其充分悬浮并吸取到离心管中，用PBS（JYK-SH-001）（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）再洗培养瓶一次，将两次液体集中到一支离心管中；
（5）1000rpm离心10min；
（6）将离心后的细胞液倒掉上清，轻轻敲击细胞沉淀，使其散开，加入1ml完全培养液（JYK-CN-0003M）稀释并充分混匀；
（7）计数，吸取细胞液20ul，加入20ul台盼蓝染液，混合均匀后吸取20ul混合液加入到细胞计数板计数，根据接种密度计算所需细胞液体积；
（8）根据实验需要，吸取一定量的细胞液加入到培养瓶，加入完全培养基（JYK-CN-0003M）（T25瓶，加入10ml；T75瓶，加入20ml），轻轻前后摇匀，在瓶身写好细胞名、培养代数、日期、姓名；
（9）镜下观察看是否已经摇匀，无误后放入培养箱37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养。
所用产品：
金源康生物 /
2.3、冻存操作
（1）取培养中的细胞，镜下观察细胞汇合和生长状态，若细胞汇合长至90%以上，即可传代，拍摄100x、200x照片各3张；
（2）去除培养上清，加入PBS（JYK-SH-001）清洗细胞（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）；
（3）加入0.25%胰酶（JYK-SX-002）（T25瓶，加入2ml；T75瓶，加入4ml），放入培养箱中或者室温下消化解离3min左右，可用显微镜观察状态，若观察到细胞离散成单个圆形、细胞间出现间隙、呈沙状移动，并悬浮在培养液中即可；
（4）加入完全培养液（JYK-CN-0003M）（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）终止消化，反复吹打瓶底和细胞，使其充分悬浮并吸取到离心管中，用PBS（T25瓶，加入5ml；T75瓶，加入10ml）再洗培养瓶一次，将两次液体集中到一支离心管中；
（5）1000rpm离心10min；
（6）将离心后的细胞液倒掉上清，轻轻敲击细胞沉淀，使其散开，先加1ml预冷冻存液（JYK-SD-003）混匀，再加入1ml预冷冻存液稀释并充分混匀；
（7）计数，吸取细胞液20ul，加入20ul台盼蓝染液，混合均匀后吸取20ul混合液加入到细胞计数板计数；
（8）根据计数结果，调节冻存液（JYK-SD-003）中的细胞最终密度为3×106/ml；
（9）将细胞分装入冻存管中，每管1ml；
（10）冻存管标记细胞名称，细胞代数信息、细胞密度、冻存时间，操作者；
（11）按照冻存程序进行细胞冻存。详细冻存程序见下表：
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三、注意事项
1.形态：HT22细胞呈神经细胞样形态，并在培养皿中贴壁生长。
2.对谷氨酸敏感性：HT22细胞对谷氨酸表现出高度敏感，是研究谷氨酸诱导的神经元细胞毒性的理想模型系统。
3.代次限制：HT22细胞在传代4-5代后活力显著下降，建议实验使用低代次细胞（P3-P5）。若需长期使用，可通过腹水培养或添加特定保护剂（如抗氧化剂）部分恢复活力。
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